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液相質(zhì)譜(LC-MS)中生物樣本預(yù)處理方法的選擇

更新時(shí)間:2025-01-13      點(diǎn)擊次數(shù):250

生物樣本分析主要考慮的問題包括濃度低、干擾多、取樣少、個(gè)體差異大、應(yīng)視樣品類型、目標(biāo)分析物的性質(zhì)選擇合適的的樣品處理方法。

生物樣本預(yù)處理方法有

一、蛋白沉淀法(PPT)

二、液液萃取法(LLE)

三、固相萃取法(SPE)

四、其他預(yù)處理方法:超濾膜過濾、稀釋、柱切換、衍生化、免疫親和萃?。↖AC)、酸或者酶水解;

一、蛋白沉淀法(PPT)

蛋白沉淀法(PPT)通過加入有機(jī)試劑、酸堿性試劑、中性鹽和酶等蛋白沉淀劑,是蛋白質(zhì)變性、達(dá)到除雜效果。

優(yōu)點(diǎn):具有操作簡單、便捷、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)。

缺點(diǎn):大量樣品導(dǎo)致多次操作,耗時(shí)長,效率低,而且蛋白沉淀后的樣品凈化程度較低,導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng),目標(biāo)物響應(yīng)低。

適用范圍:適合樣品量少的極性小分子化合物


液相質(zhì)譜(LC-MS)中生物樣本預(yù)處理方法的選擇

二、液液萃取法(LLE)

液液萃取法(LLE)采用與水互不相溶的有機(jī)溶劑,將目標(biāo)物從水相提取至有機(jī)相的方法。

優(yōu)點(diǎn):液液萃取法(LLE)適合非極性至中等極性的分析物,具有富集濃縮效果,減少基質(zhì)效應(yīng),成本低,方法易轉(zhuǎn)移,已開發(fā)。

缺點(diǎn):不適用于親水極性物質(zhì),操作中易污染,耗時(shí)較長。

適用范圍:需要根據(jù)分析物性質(zhì),考慮有機(jī)溶劑特性、體積、pH對提取效果影響;宜選擇對分析物溶解度大、沸點(diǎn)低、易濃縮、與水不互溶、無毒、穩(wěn)定、不易乳化的溶劑。

三、固相萃取法(SPE)

SPE利用小柱不同填料類型,實(shí)現(xiàn)正相、反相、離子交換等等不同的分離模式,選擇性的保留分析物而使干擾物流出,或反之,達(dá)到凈化目的。

優(yōu)點(diǎn):適用生物樣本范圍廣,可富集痕量樣本分析

缺點(diǎn):操作繁瑣,耗時(shí)長,成本高,需要豐富的操作技巧。

適用范圍:適用于從極性到非極性生物樣本多種類型的生物樣本,可富集痕量樣本分析。

96孔正壓固相萃取儀

液相質(zhì)譜(LC-MS)中生物樣本預(yù)處理方法的選擇

以上三種是生物樣本常見的預(yù)處理方法,奧96孔固相萃取儀可支持蛋白沉淀(PPT)、液液萃取(LLE)、固相萃取(SPE),可同時(shí)操作96個(gè)樣本,簡化操作步驟,縮短萃取時(shí)間,通過氣動(dòng)控制,保障很好的平行性和回收率,排除因人員操作誤差而導(dǎo)致的結(jié)果不準(zhǔn)確。

四、  其他預(yù)處理辦法:

稀釋法,樣品經(jīng)一定體積的稀釋液稀釋后直接進(jìn)樣。

優(yōu)點(diǎn):操作簡單,耗時(shí)少,成本低

缺點(diǎn):不適用濃度低的樣本,基質(zhì)效果明顯。

使用范圍:適用尿液、淚液、腦脊液等比較干凈樣本。






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